Приветствую вас! На прошлой неделе мы с нашей командой провели семинар по хроматографии в Цюрихском университете прикладных наук в Веденсвиле. Мы были счастливы представлять на семинаре секцию, посвященную флэш-хроматографии, и поделиться своим опытом с активными студентами, которые были крайне заинтересованы в получении новых знаний и, в частности, хотели понять, как следует правильно вводить образцы в систему для флэш-хроматографии.

Поскольку вопросы и ответы возникали в процессе дискуссии, мы решили поделиться с вами основными поднятыми вопросами на этом мероприятии.

Введение образца в систему для флэш-хроматографии – это довольно интересная тема для химика. Часто эту стадию рассматривают, как один из наиболее важных этапов процесса очистки. Вы спросите, почему. Начнем с главной цели флэш-хроматографии – разделение и очистка химических соединений наиболее удобным способом. Этот процесс во многом связан с потенциальной потерей вещества. Тонкий момент: способ введения образца в систему флэш-хроматографии является ключевым этапом и позволяет минимизировать потерю вещества в образце при правильном выборе метода и его аккуратной реализации.

Говоря в целом, загрузка жидкого образца, которую также называют загрузкой растворенного образца, и загрузка сухого образца – два доступных способа ввода образца в систему флэш-хроматографии. Каждый из этих методов имеет свои особенности, которые требуют отдельного рассмотрения.

Загрузка растворенного/жидкого образца

Если образец жидкий, его обычно вводят с помощью шприца напрямую сверху флэш-картриджа или через специальный клапан для ввода образца.

Введение в небольшом объеме жидкого образца считается наиболее простым и быстрым способом. Тем не менее, в данном случае нельзя однозначно оценить возможность потери вещества. Рассмотрим некоторые моменты, с которыми вы столкнетесь, если решите использовать этот способ загрузки:

Растворимость компонентов в подвижной фазе – важно знать, насколько компоненты образца растворимы в подвижной фазе и как, соответственно, они могут повести себя после их загрузки в систему флэш-хроматографии. Нередко возникает ситуация, когда градиент подвижной фазы менее полярен, чем растворитель, который использовали для растворения образца. Это может привести к тому, что некоторые или даже все компоненты, входящие в состав образца, не будут растворяться элюентом и осядут в верхней части колонки. В результате может возникнуть избыточное давление в системе и произойти потеря вещества.

Полярность используемого растворителя – если для растворения образца используются полярные растворители, они могут адсорбироваться на полярной матрице картриджа с силикагелем, что окажет негативный эффект на разделение полярных соединений (более поздно элюирующихся химических соединений на силикагеле).

Объем растворителя для растворения образца – чем больше объем растворителя, тем более вероятны вышеупомянутые риски. Вдобавок к этому, элюирующая сила растворителя может привести к слишком быстрому движению компонентов образца, что вызовет расширение полос и ухудшение разделения.

В большинстве случаев остается немного вариантов, позволяющих избежать подобных трудностей при загрузке жидкого образца. Если вы оказались в похожей ситуации, следуйте правилу → Если есть сомнения, используйте загрузку сухого образца.

Сухая загрузка образца

Обычно растворенный образец смешивают с твердым адсорбентом (очень часто это силикагель). Такую комбинацию упаривают до получения сухого порошка. После этого порошок переносят в пустой приемник и помещают перед флэш-картриджем.

Адсорбированные соединения затем постепенно переходят в разделительный картридж в зависимости от состава проходящей подвижной фазы.

Если сравнивать сухую и жидкую загрузку, метод загрузки сухого образца обычно показывает лучшие результаты разделения. Однако потенциальной проблемой для этого метода может быть избыточное количество используемого адсорбента. Это приведёт к тому, что образец будет «размываться» по избыточному объему адсорбента, что, вероятнее всего, снизит качество разделения.

Мой личный совет → используйте не более 2-4-кратного избытка адсорбента для получения оптимального разделения!

Итак, мы подискутировали на тему «Загрузка образца в систему для флэш-хроматографии», которая состоялась на прошедшем семинаре. На этот раз вместе с вами!

Делитесь своими соображениями относительно данного вопроса в комментариях!

До скорых встреч,