Cómo optimizar su fase móvil para mejorar la selectividad y la resolución en cromatografía

Como se mencionó anteriormente, la forma más eficiente de mejorar la resolución es optimizar la selectividad. Este parámetro es más fácilmente influenciado por dos factores, la fase estacionaria y la fase móvil. Desde triángulos de selectividad hasta elución de gradientes, esta publicación trata sobre cómo puede usar la fase móvil para lograr la mejor selectividad y resolución posibles en sus separaciones.

No hay nada como un buen pastel de calabaza en esta época del año. Al igual que con cualquier tarea de horneado, no se puede subestimar la importancia de los ingredientes. Tienes que elegir el tipo correcto de harina y debes elegir el tipo correcto de azúcar. No todo sabrá bien con harina de trigo integral. A veces necesitas el sabor de la azúcar morena en lugar del dulce normal del azúcar blanco.

Al igual que elegir el tipo correcto de azúcar y harina marca la diferencia en el pastel final,

la selección de las fases móviles y estacionarias adecuadas marca la diferencia para lograr la mejor selectividad en sus ciclos de cromatografía .

En la publicación anterior del blog, di algunos consejos sobre cómo establecer la fase estacionaria óptima para sus separaciones. Una vez que haya logrado esto, debe elegir la fase móvil con la selectividad más adecuada. Para fases populares como Si o C18, esto se puede determinar en una placa de TLC.

En otras palabras, debe encontrar el disolvente o la mezcla de disolventes que separa la sustancia de interés con la mayor distancia posible de los componentes adyacentes.

En general, cada disolvente tiene sus propias propiedades selectivas. L.R. Snyder y J.J. Kirkland investigó y comparó varios disolventes y agrupó los que tenían efectos similares en grupos de selectividad. Los grupos de selectividad están organizados en un triángulo de selectividad que permite comparar visualmente los disolventes.

La consecuencia práctica más importante del triángulo de selectividad es que si un determinado disolvente no puede proporcionar suficiente selectividad en una separación dada, es poco probable que cualquier otro disolvente del mismo grupo pueda hacerlo. En su lugar, debe utilizar disolventes de otros grupos de selectividad.

La elección de un disolvente de grupos lo más alejados posible entre sí en el triángulo garantiza la mayor diferencia de selectividad.

La mayoría de las separaciones se realizan con una combinación de dos disolventes. En estas situaciones, también debe establecer el radio entre los dos disolventes.

Con frecuencia, se inicia una separación isocrática, es decir, la composición de la fase móvil permanece constante durante todo el proceso de separación. En la práctica, a menudo es imposible lograr una separación isocrática. Esto es especialmente cierto cuando se trata de compuestos cuya polaridad varía ampliamente o la mezcla a purificar consta de muchos componentes. Siempre que los valores de Rf son demasiado altos, los tiempos de análisis se prolongan excesivamente. En las separaciones en las que los valores de Rf son demasiado bajos, los compuestos solo podrían eluirse de la columna con mucho tiempo y disolvente.

Para disminuir estos efectos, es posible que necesitemos cambiar la composición de la fase móvil durante el transcurso de la ejecución cromatográfica. Con la denominada elución en gradiente, puede variar la composición de la fase móvil aumentando la cantidad de disolvente con mayor fuerza de elución. En consecuencia, al comienzo de la ejecución, cuando la resistencia de la fase móvil es baja, el analito se concentrará en la fase estacionaria en la cabeza de la columna. A medida que aumenta la fuerza de la fase móvil, el analito comenzará a dividirse en la fase móvil y se moverá a lo largo de la columna. En algún momento, el analito puede estar completamente dividido en la fase móvil y se moverá con la misma velocidad que la fase móvil.

Como resultado, al usar elución en gradiente, se mejora la calidad de la separación y, como efecto secundario positivo, se reduce el tiempo de ejecución.

Al optimizar la fase móvil, se debe tener en cuenta otra característica importante, la capacidad de la fase móvil para solubilizar completamente la muestra. Tenga en cuenta que la optimización del disolvente no debe comprometer la solubilidad de la muestra.

Por cierto, a la hora de elegir el disolvente también debe prestar atención a otros parámetros, como la absorción de UV, la presión de la columna, la pureza del disolvente y la estabilidad del disolvente.

Espero haberles mostrado que alterar la selectividad proporciona un medio excelente para optimizar la resolución cromatográfica. Pequeños cambios en la selectividad pueden conducir a grandes cambios deseables en la resolución.

Pero, ¿qué pasa con la eficiencia y la retención? Tenga la seguridad de que no serán olvidados. Simplemente vuelvan al blog para que no se pierdan ninguna publicación en la que también aborde estas dos características. Y si todavía tiene hambre, consulte mi publicación anterior sobre cómo horneé un pastel de queso y reflexioné sobre el “balance dorado” en la cromatografía flash.

Hasta la próxima,

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